Plasmide CRISPR/Cas9 KO C10 (m): sc-422846

Présentation

Le gène murin **Ccl6** code la chimiokine **C10**, un ligand sécrété de la famille **CC** qui favorise le recrutement chimiotactique des monocytes/macrophages et d’autres populations myéloïdes vers les sites de stress tissulaire. C10 active des voies de signalisation via les récepteurs des chimiokines, en déclenchant des cascades couplées aux protéines G associées au remodelage de l’actine, à la migration cellulaire et aux réseaux de cytokines inflammatoires, modulant ainsi le trafic des leucocytes et l’activation de l’immunité innée. L’expression de **Ccl6** est fréquemment associée à des microenvironnements riches en macrophages et peut influencer des processus tels que la réparation des plaies, le remodelage fibrotique et les réponses de l’hôte aux infections. Des gradients de chimiokines dérégulés impliquant C10 sont pertinents dans des modèles expérimentaux d’inflammation chronique, où une infiltration myéloïde altérée contribue à la pathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C10 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl6 pour l'étude de la signalisation de C10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl6 essentiels à la fonction de C10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C10 plasmide HDR (m) et le C10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.