Plasmide CRISPR d'Activation (m) c-Rel: sc-422641-ACT

Rel code pour c-Rel, un membre de la famille NF-κB de facteurs de transcription, qui régule des programmes d’expression génique inductibles contrôlant l’activation, la prolifération et la survie des cellules immunitaires dans les tissus de souris. En réponse à une stimulation par les récepteurs de l’antigène, les récepteurs de type Toll ou des cytokines, c-Rel contribue à la signalisation canonique de NF-κB en aval de la dégradation d’IκB médiée par IKK, permettant des réponses transcriptionnelles nucléaires. c-Rel joue un rôle particulièrement important dans la différenciation des lymphocytes et les réseaux transcriptionnels inflammatoires, où une activité altérée peut remodeler la production de cytokines et l’homéostasie immunitaire. Une signalisation Rel/c-Rel dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte d’inflammations de type auto-immun, des réponses aux infections et d’états transcriptionnels oncogéniques au sein des lignées hématopoïétiques.

c-Rel Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Rel sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Rel Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Rel dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Rel, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Rel. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Rel natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Rel au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Rel dans les cellules tumorales présentant une expression de Rel silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.