C-Nap1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421134

Descripción general

Cep250 codifica C-Nap1, una proteína centrosomal de tipo *coiled-coil* concentrada en los extremos proximales de los centríolos, donde contribuye a la cohesión del centrosoma y a la organización del material pericentriolar. C-Nap1 funciona dentro de la dinámica del centrosoma regulada por el ciclo celular, coordinándose con la señalización por quinasas y con proteínas de andamiaje para favorecer el ensamblaje del huso bipolar, la segregación cromosómica precisa y el mantenimiento de la arquitectura de los microtúbulos. La alteración de la cohesión del centrosoma y de la integridad del huso se asocia estrechamente con la inestabilidad genómica, la división celular anómala y fenotipos del desarrollo o neurodegenerativos en sistemas modelo. Por ello, en estudios en células y tejidos de ratón, Cep250 es un nodo útil para investigar vías asociadas al centrosoma que influyen en la proliferación, la diferenciación y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C-Nap1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cep250 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cep250 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cep250 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C-Nap1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cep250 para la investigación de la señalización de C-Nap1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cep250 críticos para la función de C-Nap1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cep250 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C-Nap1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C-Nap1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cep250. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C-Nap1 (m) y el plásmido HDR C-Nap1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cep250 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cep250 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.