Plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Myb (m): sc-421766

Présentation

Myb code le facteur de transcription c-Myb, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN qui contrôle des programmes d’expression génique indispensables à la prolifération, à la survie et à l’engagement de lignée dans les compartiments hématopoïétiques et d’autres compartiments progéniteurs. c-Myb module la progression du cycle cellulaire et la différenciation en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec des cofacteurs et des régulateurs de la chromatine, en intégrant des signaux qui influencent l’auto-renouvellement et la maturation. Une activité MYB dérégulée a été associée à des altérations de l’hématopoïèse et à des états transcriptionnels oncogènes dans de nombreuses tumeurs malignes, ce qui en fait une cible fréquente pour des études mécanistiques de la transformation et du blocage de la différenciation. Dans des modèles murins, la perturbation de Myb est largement utilisée pour disséquer le timing développemental, le maintien des cellules souches/progénitrices et les circuits transcriptionnels à l’origine de phénotypes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Myb (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Myb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Myb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Myb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine c-Myb.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Myb pour l'étude de la signalisation de c-Myb, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Myb essentiels à la fonction de c-Myb
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Myb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le c-Myb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le c-Myb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Myb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le c-Myb plasmide HDR (m) et le c-Myb (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Myb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Myb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.