Plasmide CRISPR d'Activation (h) c-Maf: sc-410543-ACT

MAF code pour c-Maf, un facteur de transcription de type bZIP (basic leucine zipper) qui contrôle la spécification des lignages et les programmes de différenciation dans des tissus immunitaires et non immunitaires. c-Maf intègre des signaux issus des voies de réponse aux cytokines et au stress afin de réguler des réseaux transcriptionnels impliqués dans la polarisation des lymphocytes T, la fonction des macrophages et l’adaptation cellulaire aux signaux métaboliques. En modulant l’activité des enhancers et en coopérant avec d’autres régulateurs transcriptionnels, c-Maf influence des processus tels que la prolifération, la survie et l’expression de gènes effecteurs. Une expression ou une activité dérégulée de MAF a été associée à des perturbations de l’homéostasie immunitaire et à des états transcriptionnels altérés, observés dans divers contextes de recherche sur les maladies hématologiques et inflammatoires.

c-Maf Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Maf Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Maf. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Maf au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Maf dans les cellules tumorales présentant une expression de MAF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.