c-IAP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400762-ACT

Das humane BIRC3-Gen kodiert c-IAP2, eine RING-Domänen-E3-Ubiquitin-Ligase, die Apoptose und inflammatorische Signalwege reguliert, indem sie zentrale Komponenten von TNF-Rezeptorkomplexen ubiquitiniert und die Caspase-Aktivierung moduliert. c-IAP2 ist an der Kontrolle des NF-κB-Signalwegs beteiligt, einschließlich des Crosstalks zwischen kanonischer und nicht-kanonischer NF-κB-Signalisierung durch Regulation der NIK-Stabilität und ein ubiquitinabhängiges Checkpointing der rezeptornahen Signalübertragung. Über diese Funktionen beeinflusst BIRC3 das Zellüberleben, zytokininduzierte Antworten und die Anpassung an Stress in Immun- und Epithelkontexten. Eine Fehlregulation der BIRC3-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderten Apoptoseschwellen und aberranter NF-κB-Signalisierung in mehreren krankheitsrelevanten Modellen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in der Forschung zu Zelltod und Entzündung stützt.

c-IAP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BIRC3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

c-IAP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BIRC3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BIRC3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen c-IAP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BIRC3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von c-IAP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des c-IAP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BIRC3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.