Plasmide Double Nickase (h) c-Fgr: sc-400702-NIC

FGR code pour c-Fgr, une tyrosine kinase non réceptrice de la famille Src, enrichie dans les cellules de la lignée myéloïde, où elle couple les signaux issus des immunorécepteurs et des intégrines à des cascades de phosphorylation intracellulaires. c-Fgr contribue à la régulation de l’adhésion, de la migration et de la dégranulation des leucocytes, ainsi qu’à la signalisation phagocytaire, en s’articulant avec des voies telles que la signalisation des récepteurs Fc, les réseaux de kinases dépendants des ITAM et les modules de remodelage du cytosquelette, notamment PI3K et MAPK/ERK. Par ces fonctions, FGR est impliqué dans la signalisation inflammatoire et les états d’activation des cellules de l’immunité innée, et une activité altérée des kinases de la famille Src a été associée à des dérégulations des processus hématopoïétiques et immunitaires. c-Fgr humain est donc largement étudié pour comprendre les mécanismes de dialogue croisé entre récepteurs immunitaires, l’amplification des signaux et le contrôle, dépendant des kinases, de la motilité cellulaire.

c-Fgr Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FGR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FGR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FGR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FGR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.