Plasmide CRISPR d'Activation (m) C/EBP ζ: sc-419622-ACT

Cebpz code le facteur de transcription C/EBP zêta (C/EBPζ), membre de la famille des protéines de liaison CCAAT/enhancer (C/EBP), qui module des programmes d’expression génique impliqués dans le contrôle de la croissance cellulaire, la différenciation et la transcription en réponse au stress. C/EBPζ peut agir comme régulateur dépendant du contexte en s’associant à d’autres facteurs bZIP afin d’ajuster l’activité des promoteurs et des enhancers, reliant ainsi des signaux extracellulaires à des modifications de la transcription dépendante de l’ARN polymérase II. Dans les systèmes murins, une activité altérée de C/EBPζ est pertinente pour l’étude de la signalisation inflammatoire, de l’adaptation métabolique et des décisions de destin cellulaire, là où les réseaux de la famille C/EBP s’articulent avec les voies des cytokines et des facteurs de croissance. Ces propriétés font de Cebpz un nœud utile pour disséquer les circuits transcriptionnels sous-jacents aux changements phénotypiques observés dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies, sans préjuger d’issues cliniques.

C/EBP ζ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cebpz sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C/EBP ζ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cebpz dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cebpz, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C/EBP ζ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cebpz natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C/EBP ζ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C/EBP ζ dans les cellules tumorales présentant une expression de Cebpz silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.