Plasmide CRISPR d'Activation (h) C/EBP ε: sc-402310-ACT

CEBPE code C/EBP ε, un facteur de transcription bZIP spécifique de la lignée myéloïde qui coordonne les étapes tardives de la granulopoïèse et la maturation fonctionnelle des neutrophiles. En se liant aux éléments CCAAT/enhancer et en coopérant avec des régulateurs de lignée tels que GFI1 et SPI1/PU.1, C/EBP ε module des programmes transcriptionnels contrôlant la sortie du cycle cellulaire, l’expression des protéines des granules et les voies effectrices de l’immunité innée. Une perturbation de l’expression ou de l’activité de CEBPE altère la différenciation des neutrophiles et est associée à des défauts de fonction des granulocytes, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le développement hématopoïétique et la signalisation inflammatoire. Dans des modèles de biologie du cancer et de l’immunité, une transcription régulée par CEBPE altérée peut servir d’indicateur d’un engagement et d’un état de maturation myéloïdes dérégulés.

C/EBP ε Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEBPE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C/EBP ε Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEBPE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEBPE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C/EBP ε. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEBPE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C/EBP ε au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C/EBP ε dans les cellules tumorales présentant une expression de CEBPE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.