Plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP δ (h): sc-400772

Présentation

CEBPD code le facteur de transcription C/EBPδ, une protéine à fermeture éclair leucine basique (bZIP) qui régule des programmes d’expression génique liés à la signalisation de l’immunité innée, aux réponses au stress cellulaire et à la différenciation. C/EBPδ est induit par des signaux inflammatoires et participe à des réseaux transcriptionnels en aval des voies des cytokines et des récepteurs Toll-like, modulant l’expression de médiateurs impliqués dans la réponse de phase aiguë et des fonctions associées à la lignée myéloïde. Il interagit également avec les voies de contrôle du cycle cellulaire et de survie, contribuant à une régulation dépendante du contexte de la prolifération, de la sénescence et de l’adaptation métabolique. Une activité dérégulée de CEBPD a été rapportée dans diverses affections inflammatoires et dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier le contrôle transcriptionnel dans des états de signalisation impliqués dans la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP δ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CEBPD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CEBPD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CEBPD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C/EBP δ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CEBPD pour l'étude de la signalisation de C/EBP δ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CEBPD essentiels à la fonction de C/EBP δ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CEBPD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C/EBP δ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C/EBP δ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CEBPD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C/EBP δ plasmide HDR (h) et le C/EBP δ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CEBPD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CEBPD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.