Plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP β (r): sc-437357

Présentation

La protéine de liaison à CCAAT/« enhancer » bêta (C/EBPβ, Cebpb) est un facteur de transcription à fermeture éclair leucine basique (bZIP) qui coordonne des programmes génétiques contrôlant la différenciation myéloïde, l’adipogenèse et les réponses de phase aiguë des hépatocytes dans des cellules de rat. Elle intègre des signaux issus de voies inflammatoires et métaboliques, notamment le dialogue croisé entre les voies JAK/STAT activées par les cytokines et NF-κB, afin de réguler des réseaux transcriptionnels qui façonnent l’activation immunitaire, les réponses au stress et la prolifération cellulaire. L’activité de C/EBPβ influence la polarisation des macrophages et l’expression de gènes lipogéniques, ce qui l’associe à des modèles expérimentaux d’inflammation chronique, de dysfonctionnement métabolique et de remodelage tissulaire. La perturbation de la transcription dépendante de Cebpb est donc largement utilisée pour étudier les mécanismes à l’origine de la fibrose, de la résistance à l’insuline et de la dynamique des signaux inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP β (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C/EBP β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de C/EBP β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de C/EBP β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C/EBP β plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le C/EBP β plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C/EBP β plasmide HDR (r) et le C/EBP β (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.