C/EBP α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400195

Descripción general

CEBPA codifica el factor de transcripción C/EBPα, una proteína de cremallera de leucina básica que se une a elementos CCAAT/enhancer para coordinar programas de expresión génica específicos de linaje. Es un regulador clave de la diferenciación hematopoyética y mieloide, e integra señales con el control transcripcional de la detención del ciclo celular, la homeostasis metabólica y la maduración granulocítica. C/EBPα interactúa con vías que regulan la remodelación de la cromatina y con redes transcripcionales que incluyen la señalización por citocinas y otros reguladores mieloides, modelando el desarrollo de la inmunidad innata. La desregulación de la expresión o la función de CEBPA se asocia con estados de diferenciación alterados y fenotipos proliferativos, por lo que se estudia ampliamente en contextos como la biología de las neoplasias hematológicas y las decisiones de destino de células madre/progenitoras.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CEBPA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CEBPA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CEBPA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C/EBP α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CEBPA para la investigación de la señalización de C/EBP α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CEBPA críticos para la función de C/EBP α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CEBPA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C/EBP α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C/EBP α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CEBPA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C/EBP α (h) y el plásmido HDR C/EBP α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CEBPA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CEBPA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.