Plasmide CRISPR/Cas9 KO BVES (h): sc-403698

Présentation

La substance épicardique des vaisseaux sanguins (BVES), également connue sous le nom de POPDC1, est une protéine associée à la membrane, enrichie dans les muscles striés et les tissus épithéliaux, qui contribue à l’adhérence cellule–cellule et à la polarité épithéliale. BVES participe à des réseaux de signalisation liés à la liaison de l’AMPc, au trafic membranaire et à l’organisation du cytosquelette, aidant à coordonner l’intégrité des jonctions et l’architecture tissulaire. Une expression ou une localisation altérée de BVES a été associée à une perturbation de la fonction barrière et à une migration cellulaire aberrante, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des transitions épithélio‑mésenchymateuses et du remodelage tissulaire. En biologie du cancer et en recherche cardiovasculaire, BVES est fréquemment étudiée pour ses rôles dans le maintien d’une organisation cellulaire normale et dans des voies influençant la prolifération et la motilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BVES (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BVES dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BVES, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BVES à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BVES.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BVES pour l'étude de la signalisation de BVES, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BVES essentiels à la fonction de BVES
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BVES pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BVES plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BVES plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BVES. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BVES plasmide HDR (h) et le BVES (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BVES pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BVES définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.