Plasmide Double Nickase (h) BUB1: sc-402006-NIC

BUB1 code une kinase protéique sérine/thréonine qui constitue un composant central du point de contrôle d’assemblage du fuseau, en coordonnant la congression des chromosomes et le déclenchement opportun de l’anaphase afin de préserver la stabilité du génome. Au niveau des kinétochores, BUB1 contribue à des événements de recrutement et de phosphorylation qui régulent la signalisation du point de contrôle et la progression mitotique, en interaction avec des voies contrôlant les attaches kinétochore–microtubule et la ségrégation chromosomique. Une activité ou une expression dérégulée de BUB1 est associée à l’instabilité chromosomique et à l’aneuploïdie, des caractéristiques moléculaires fréquemment observées dans des états pathologiques prolifératifs. En tant que facteur de surveillance de la mitose, BUB1 est largement étudiée dans le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN liées au stress réplicatif, ainsi que les mécanismes qui couplent la fidélité du point de contrôle à la transformation tumorigène.

BUB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BUB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BUB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BUB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BUB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.