Plásmido Doble Nickase (h) Btk: sc-400603-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Btk consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Btk (h) y el plásmido de doble nickasa Btk (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BTK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Btk Anticuerpo (E-9): sc-28387
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Btk | sc-400603-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Btk | sc-400603-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La tirosina quinasa de Bruton (BTK; Btk) es una quinasa de la familia Tec no asociada a receptor que transduce señales aguas abajo del receptor de células B y de múltiples inmunorreceptores, acoplando las entradas de activación a la fosfolipasa Cγ2, los flujos de calcio y las vías de señalización MAPK, PI3K–AKT y NF-κB. En las células hematopoyéticas humanas, BTK ayuda a coordinar el desarrollo de las células B, la activación impulsada por antígenos, la producción de citocinas y las respuestas de receptores de la inmunidad innata en linajes mieloides. La señalización desregulada de BTK está implicada en disfunción inmunitaria y contribuye a programas patógenos de supervivencia y activación en varias neoplasias de células B, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la señalización de linfocitos. BTK también se conecta con vías que controlan la adhesión y la migración celular, lo que respalda la investigación sobre el tráfico de células inmunitarias y las interacciones con el microambiente.
Btk El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BTK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BTK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BTK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BTK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.