Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTG4: sc-408621-ACT

BTG4 (B-cell translocation gene 4) code une protéine antiproliférative de la famille BTG/Tob, impliquée dans la régulation du métabolisme des ARNm et des programmes transcriptionnels qui orientent la progression du cycle cellulaire et la différenciation. Dans les cellules humaines, BTG4 a été associée au contrôle de la deadénylation des ARNm maternels et à la répression de la traduction, reliant la régulation génique post‑transcriptionnelle au calendrier du développement et aux transitions de destin cellulaire. Par ses interactions avec des composants de la deadénylase CCR4–NOT et d’autres facteurs apparentés de régulation de l’ARN, BTG4 peut influencer la stabilité globale des transcrits et la production protéomique, des processus fréquemment perturbés lors de la transformation oncogénique. Une activité altérée de la famille BTG est associée à une dérégulation du contrôle de la croissance et des voies de réponse au stress, faisant de BTG4 un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur la prolifération, la différenciation et le turnover des ARN.

BTG4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BTG4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTG4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BTG4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BTG4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTG4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BTG4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTG4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTG4 dans les cellules tumorales présentant une expression de BTG4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.