Plasmide CRISPR/Cas9 KO BTG3 (h): sc-407253

Présentation

BTG3 (B-cell translocation gene 3) code une protéine antiproliférative de la famille BTG/TOB, qui contribue à coordonner le contrôle du cycle cellulaire et la différenciation cellulaire. BTG3 agit comme corégulateur transcriptionnel et interagit avec des voies impliquées dans la transition G1/S, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation apoptotique, reliant ainsi son activité au maintien de la stabilité génomique. Une expression altérée de BTG3 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est fréquemment associée à une prolifération dérégulée, à une signalisation de réponse au stress perturbée et à des modifications de l’état de différenciation, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du contrôle de la croissance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BTG3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BTG3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BTG3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BTG3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BTG3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BTG3 pour l'étude de la signalisation de BTG3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BTG3 essentiels à la fonction de BTG3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BTG3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BTG3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BTG3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BTG3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BTG3 plasmide HDR (h) et le BTG3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BTG3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BTG3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.