Plásmido CRISPR de Activación (m) BTG2: sc-419374-ACT

Btg2 (BTG2) es un regulador antiproliferativo de respuesta inmediata (immediate-early) que modula la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la transcripción sensible al estrés en células de ratón. BTG2 interactúa con vías de control transcripcional y de recambio de ARNm, incluidas interacciones con los complejos deadenilasas CCR4–NOT, conectando señales mitogénicas con cambios en la expresión génica y la restricción del crecimiento celular. Se estudia con frecuencia en el contexto de la señalización por daño en el ADN y de respuestas asociadas a p53, donde la actividad alterada de BTG2 puede influir en el control de puntos de control (checkpoints), la susceptibilidad a la apoptosis y los programas de senescencia celular. La desregulación de la expresión de BTG2 se ha asociado con la transformación oncogénica y la progresión tumoral en múltiples sistemas modelo, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del control de la proliferación y de redes transcripcionales vinculadas al cáncer.

BTG2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Btg2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTG2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Btg2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Btg2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Btg2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTG2 en células tumorales con expresión de Btg2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.