Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTF3a/b: sc-403520-ACT

BTF3 code le facteur de transcription basal 3, qui produit les isoformes BTF3a et BTF3b participant à l’initiation de la transcription dépendante de l’ARN polymérase II ainsi qu’à une régulation plus large de l’expression génique. BTF3 agit également comme facteur associé aux polypeptides naissants, reliant les programmes transcriptionnels à des processus co‑traductionnels qui influencent la protéostasie et les réponses cellulaires au stress. Par ces fonctions, BTF3 intervient dans des voies fondamentales contrôlant la prolifération, l’apoptose et l’adaptation au stress protéotoxique. Une expression altérée de BTF3 a été rapportée dans de nombreux cancers et dans d’autres troubles caractérisés par une dérégulation de la transcription et de l’homéostasie protéique, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique pour l’exploration des voies de signalisation.

BTF3a/b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BTF3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTF3a/b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BTF3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BTF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTF3a/b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BTF3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTF3a/b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTF3a/b dans les cellules tumorales présentant une expression de BTF3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.