Plasmide Double Nickase (h) BTEB2: sc-401680-NIC

KLF5, également connu sous le nom de BTEB2, code un facteur de transcription à doigts de zinc de type Krüppel qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’homéostasie épithéliale. BTEB2 intègre des signaux issus de voies mitogènes et de réponse au stress, notamment MAPK/ERK et PI3K/AKT, et module des réseaux transcriptionnels associés à la prolifération et à la survie. Il participe également au remodelage tissulaire en influençant l’expression de gènes de la matrice extracellulaire et de l’inflammation, façonnant les transitions d’état cellulaire au cours du développement et de la réparation. Une activité dérégulée de KLF5 a été associée à une altération du contrôle de la croissance et de la plasticité de lignée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle et des interactions entre voies de signalisation.

BTEB2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KLF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KLF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KLF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KLF5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.