Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTEB2: sc-401680-ACT

KLF5 (BTEB2) code un facteur de transcription à doigts de zinc de type Krüppel qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation épithéliale et le remodelage tissulaire. Il intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK et TGF-β/SMAD et coordonne des réponses transcriptionnelles qui influencent la prolifération, la migration et la dynamique de la matrice extracellulaire. Une activité dérégulée de KLF5 a été associée à des phénotypes oncogéniques et inflammatoires dans de nombreux tissus, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour étudier le contrôle transcriptionnel de la croissance et des réponses au stress. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de BTEB2 aide à disséquer des réseaux de régulation génique dépendants du contexte et les interactions entre voies de signalisation à l’origine d’états cellulaires associés à la maladie.

BTEB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLF5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTEB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLF5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLF5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTEB2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLF5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTEB2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTEB2 dans les cellules tumorales présentant une expression de KLF5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.