Plasmide Double Nickase (h) BTEB1: sc-402170-NIC

KLF9 (également connu sous le nom de BTEB1) code un facteur de transcription à doigts de zinc de type Krüppel qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler, de manière dépendante du contexte, des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress cellulaire. BTEB1 intègre des signaux issus des voies associées aux récepteurs nucléaires et à la MAPK pour moduler les sorties transcriptionnelles qui façonnent le métabolisme, le développement et le remodelage tissulaire. Une expression altérée de KLF9 a été associée à une dérégulation de la gestion du stress oxydatif et à des réseaux transcriptionnels aberrants observés dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, notamment des phénotypes endocriniens et neurologiques ainsi que la biologie tumorale. En tant que régulateur transcriptionnel présentant une large occupation des promoteurs, KLF9 est fréquemment étudié pour l’architecture de ses gènes cibles en aval et pour son rôle dans l’établissement d’états transcriptionnels spécifiques de lignée.

BTEB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KLF9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KLF9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KLF9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KLF9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.