Plasmide CRISPR d'Activation (m) BTEB1: sc-421299-ACT

Le gène murin *Klf9* code le facteur de transcription BTEB1 (Kruppel-like factor 9), une protéine à doigts de zinc se liant à l’ADN qui module l’activité des promoteurs en réponse à des signaux développementaux et hormonaux. BTEB1 intègre des signaux issus de voies de récepteurs nucléaires, notamment les programmes des glucocorticoïdes et des hormones thyroïdiennes, afin de façonner des réseaux géniques contrôlant la maturation neuronale, la différenciation cellulaire et la transcription adaptative au stress. Il a également été associé à la régulation des points de contrôle du cycle cellulaire, aux réponses au stress oxydatif et à l’homéostasie métabolique via une activation et une répression transcriptionnelles dépendantes du contexte. Une dérégulation de l’activité de Klf9/BTEB1 a été reliée à des altérations de la fonction neuroendocrinienne et à des états transcriptionnels pertinents pour l’inflammation, la fibrose et le remodelage oncogénique, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des circuits de régulation génique.

BTEB1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Klf9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTEB1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Klf9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Klf9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTEB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Klf9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTEB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTEB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Klf9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.