BTEB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402170-ACT

KLF9 (BTEB1) codifica um fator de transcrição do tipo Krüppel que se liga a elementos promotores ricos em GC para regular programas dependentes do contexto que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a expressão gênica responsiva ao estresse. Em células humanas, o BTEB1 integra sinais de vias associadas a receptores nucleares e à MAPK para moldar os resultados transcricionais ligados à homeostase metabólica e à responsividade endócrina. A expressão alterada de KLF9 tem sido associada à proliferação desregulada, à sinalização inflamatória e à remodelação específica de linhagens celulares, tornando-o um nó útil para estudar perturbações em redes transcricionais. Essas propriedades sustentam pesquisas mecanísticas sobre regulação da cromatina, transcrição dependente de estímulos e assinaturas de expressão gênica relevantes para doenças.

BTEB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTEB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTEB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTEB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTEB1 em células tumorais com expressão de KLF9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.