Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTC: sc-401927-ACT

Le gène humain **BTC** code la **bétacelluline**, un ligand de la famille des facteurs de croissance épidermiques, synthétisé sous forme de précurseur ancré à la membrane puis libéré par clivage protéolytique (« shedding ») afin de signaler dans des contextes autocrines et paracrines. BTC active les récepteurs **EGFR/ERBB**, déclenchant en aval les voies **MAPK/ERK** et **PI3K/AKT**, et modulant la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que les interactions épithélio-mésenchymateuses. Son expression est régulée lors du remodelage tissulaire et de la signalisation inflammatoire, et a été associée à des altérations des circuits de facteurs de croissance en biologie du cancer, ainsi qu’à des contextes cardiométaboliques et endocriniens, notamment la fonction des îlots pancréatiques. En tant que facteur de croissance sécrété/arrimé à la membrane, BTC est fréquemment utilisé pour étudier la dynamique récepteur–ligand, les programmes transcriptionnels et le dialogue entre voies (« crosstalk ») qui influencent les transitions d’état cellulaire.

BTC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BTC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BTC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BTC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BTC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTC dans les cellules tumorales présentant une expression de BTC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.