Plasmide CRISPR/Cas9 KO BTBD4 (m): sc-428253

Présentation

Zbtb46 code la protéine BTBD4, un facteur contenant un domaine BTB/POZ impliqué dans des programmes de régulation transcriptionnelle qui façonnent l’identité cellulaire et les états de différenciation dans les tissus de souris. En immunologie, l’expression de Zbtb46 est largement utilisée comme marqueur de la lignée des cellules dendritiques classiques, et son activité régulatrice est étudiée dans le contexte de la présentation de l’antigène, de la signalisation inflammatoire et de la surveillance immunitaire homéostatique. Des réseaux de gènes associés à Zbtb46 altérés ont été examinés dans des modèles d’immunité associée aux tumeurs et de maladies inflammatoires, où des modifications de la fonction des cellules dendritiques peuvent influencer les profils de cytokines et l’amorçage des lymphocytes T. Par conséquent, la perturbation de Zbtb46/BTBD4 constitue une approche utile pour disséquer les circuits transcriptionnels reliant la différenciation, les voies de l’immunité innée et les réponses au microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BTBD4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zbtb46 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zbtb46, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zbtb46 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BTBD4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zbtb46 pour l'étude de la signalisation de BTBD4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zbtb46 essentiels à la fonction de BTBD4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zbtb46 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BTBD4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BTBD4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zbtb46. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BTBD4 plasmide HDR (m) et le BTBD4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zbtb46 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zbtb46 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.