Plasmide Double Nickase (m) BTBD14B: sc-426213-NIC

Le gène murin **Nacc1** code **BTBD14B**, une protéine nucléaire contenant un domaine BTB/POZ, impliquée dans la régulation transcriptionnelle via des interactions protéine–protéine et l’assemblage de complexes répressifs ou modulateurs. BTBD14B a été associée au contrôle de programmes d’état cellulaire, notamment la prolifération, la différenciation et l’expression de gènes répondant au stress, ce qui concorde avec des fonctions de régulation liée à la chromatine et des voies de renouvellement des protéines associées à l’ubiquitine. La dérégulation de Nacc1/BTBD14B a été reliée dans la littérature à des altérations du contrôle du cycle cellulaire et des voies de signalisation de survie, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier des réseaux transcriptionnels dépendants du contexte dans le développement et dans des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie.

BTBD14B Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nacc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nacc1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nacc1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nacc1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.