Brn-2/BRN2/POU3F2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400392

Descripción general

POU3F2 (Brn-2/BRN2) es un factor de transcripción con dominio homeobox tipo POU que se une a motivos octámeros para regular programas de expresión génica que controlan la especificación de linaje, la diferenciación neuronal y el mantenimiento de la identidad celular. En el sistema nervioso contribuye al desarrollo cortical y a redes transcripcionales neurogénicas, mientras que en linajes derivados de la cresta neural coordina transiciones en el estado de diferenciación. La actividad aberrante de POU3F2 se ha vinculado con circuitos transcripcionales desregulados en biología del cáncer, particularmente en el melanoma, donde converge con el cambio de estado impulsado por MAPK y con programas asociados a la invasión. Como regulador nuclear, BRN2 constituye un nodo manejable para investigar el control potenciador–promotor, la ocupación de la cromatina y la reconfiguración transcripcional dependiente del contexto en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Brn-2/BRN2/POU3F2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POU3F2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POU3F2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POU3F2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Brn-2/BRN2/POU3F2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POU3F2 para la investigación de la señalización de Brn-2/BRN2/POU3F2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POU3F2 críticos para la función de Brn-2/BRN2/POU3F2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POU3F2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POU3F2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Brn-2/BRN2/POU3F2 (h) y el plásmido HDR Brn-2/BRN2/POU3F2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POU3F2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POU3F2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.