Plasmide Double Nickase (h) Brk: sc-401127-NIC

PTK6 code la tyrosine kinase non réceptrice Brk, une enzyme de signalisation apparentée à Src qui module, via la phosphorylation, le contrôle de la prolifération, de la différenciation et de la survie des cellules épithéliales. Brk intègre des signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase et d’adaptateurs intracellulaires pour influencer des voies telles que la signalisation de la famille EGFR/HER, PI3K–AKT et MAPK/ERK, avec des effets en aval sur la dynamique du cytosquelette et la motilité cellulaire. Dans les tissus humains, l’expression et l’activité de PTK6 sont fréquemment étudiées dans le cadre de la biologie épithéliale et de la signalisation oncogénique, où des réseaux de phosphorylation dépendants de Brk altérés ont été associés à des modifications de la réponse aux facteurs de croissance et à des phénotypes invasifs. Ces caractéristiques font de PTK6 une cible utile pour disséquer les circuits de signalisation pilotés par les kinases et le remodelage des voies phosphoprotéomiques dans des modèles pertinents pour les maladies.

Brk Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTK6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTK6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTK6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTK6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.