Plasmide Double Nickase (h) brevican: sc-402668-NIC

BCAN code la brévicane, un protéoglycane à sulfate de chondroïtine enrichi dans le cerveau, constituant majeur de la matrice extracellulaire et des filets périneuronaux. La brévicane contribue au développement neural et à la stabilisation synaptique en modulant les interactions cellule–matrice, la croissance des neurites et les propriétés de diffusion extracellulaire dans le SNC. Par ses interactions avec des partenaires de liaison à l’hyaluronane et d’autres constituants matriciels, elle influence l’organisation de la matrice extracellulaire, la plasticité neuronale et les processus de remodelage tissulaire. Des altérations de l’expression de BCAN et du traitement (processing) de la brévicane ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, et ont été étudiées dans le contexte des lésions du SNC et du remodelage de la matrice extracellulaire associé aux gliomes.

brevican Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BCAN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BCAN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BCAN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BCAN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.