Plásmido Doble Nickase (h) BRD4: sc-400519-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BRD4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BRD4 (h) y el plásmido de doble nickasa BRD4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BRD4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BRD4 Anticuerpo (A-7): sc-518021
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BRD4 | sc-400519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BRD4 | sc-400519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRD4 (bromodominio que contiene 4) es un lector de cromatina de la familia BET que reconoce lisinas acetiladas en las colas de histonas para regular la elongación transcripcional y la actividad de los potenciadores (enhancers). Coordina el reclutamiento de P-TEFb y de la ARN polimerasa II, vinculando el estado de la cromatina con la expresión de genes que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización inflamatoria. BRD4 actúa de forma destacada en superpotenciadores y modula programas como la transcripción impulsada por MYC, lo que lo convierte en un nodo clave de la regulación epigenética. La actividad desregulada de BRD4 y los paisajes de potenciadores alterados se asocian con fenotipos proliferativos e inflamatorios y se han estudiado en múltiples contextos relevantes para el cáncer y el sistema inmunitario.
BRD4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BRD4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BRD4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BRD4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BRD4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.