Particules Lentivirales d'Activation (h) BRCA1: sc-400093-LAC

BRCA1 code le suppresseur de tumeur humain BRCA1, une protéine nucléaire multifonctionnelle essentielle au maintien de l’intégrité du génome. BRCA1 coordonne la réparation des cassures double brin de l’ADN par recombinaison homologue, contribue à la signalisation des points de contrôle, et intervient dans les réponses au stress de réplication ainsi que dans le remodelage de la chromatine via des complexes protéiques tels que BRCA1–BARD1. Grâce à son activité de ligase ubiquitine et à la régulation de la transcription ainsi que de la dynamique des foyers de dommages à l’ADN, BRCA1 aide à contrôler la progression du cycle cellulaire et à préserver la stabilité chromosomique. L’altération ou la dérégulation de BRCA1 est fortement associée à une capacité de réparation de l’ADN diminuée et à une instabilité génomique accrue, ce qui en fait un nœud central des voies de réponse aux dommages de l’ADN pertinentes pour la recherche en biologie du cancer.

Les particules d'activation lentivirales BRCA1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BRCA1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BRCA1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BRCA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BRCA1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BRCA1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.