Plasmide Double Nickase (r) BRCA1: sc-437320-NIC
- Espèces cibles: rat
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (r) BRCA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BRCA1 Double Nickase (r) et le plasmide BRCA1 Double Nickase (r2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant . Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BRCA1 Antibody (287.17): sc-135732
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (r) BRCA1 | sc-437320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (r2) BRCA1 | sc-437320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRCA1 code une protéine suppresseur de tumeur multifonctionnelle qui orchestre le maintien du génome en coordonnant la réparation des cassures double brin de l’ADN par recombinaison homologue, la protection des fourches de réplication et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire. Dans les cellules de rat, BRCA1 agit au sein de l’axe BRCA1–PALB2–BRCA2 pour favoriser le chargement de RAD51 et participe aux voies de signalisation des dommages à l’ADN régulées par les kinases ATM/ATR. La perte ou l’altération de BRCA1 perturbe les processus de réparation associés à la chromatine, accroît l’instabilité génomique et rend les cellules plus sensibles au stress réplicatif. Ces mécanismes font de BRCA1 un nœud central pour étudier, dans des modèles de rongeurs, le choix des voies de réparation de l’ADN, la fidélité mitotique et des phénotypes d’intégrité génomique pertinents pour le cancer.
BRCA1 Le plasmide double nickase (r) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.