Plasmide Double Nickase (h) BRAT1: sc-415146-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BRAT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BRAT1 Double Nickase (h) et le plasmide BRAT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BRAT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BRAT1 | sc-415146-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BRAT1 | sc-415146-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAT1 (BRCA1-associated ATM activator 1) code une protéine nucléaire impliquée dans la réponse aux dommages de l’ADN, où elle interagit avec les voies de signalisation ATM/ATR et des voies associées à BRCA1 afin de soutenir la stabilité du génome. BRAT1 a été associée à la régulation du contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et à la survie cellulaire après un stress génotoxique, ce qui concorde avec des rôles dans la coordination d’événements de phosphorylation en aval et l’activation de voies de réparation. L’altération ou le dysfonctionnement de BRAT1 est associé à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques, et a été étudié dans le contexte de troubles caractérisés par une réparation de l’ADN déficiente ainsi que par des réponses au stress mitochondrial ou métabolique. Par conséquent, BRAT1 suscite un intérêt pour des études mécanistiques de la signalisation des checkpoints, du stress de réplication et du maintien du génome dans les cellules humaines.
BRAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BRAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BRAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BRAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BRAT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.