Plasmide Double Nickase (h) bradykinin: sc-402422-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) bradykinin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide bradykinin Double Nickase (h) et le plasmide bradykinin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KNG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: bradykinin Antibody (4A1): sc-293304
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) bradykinin | sc-402422-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) bradykinin | sc-402422-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **KNG1** code le kininogène de haut poids moléculaire, une protéine plasmatique multifonctionnelle qui sert de précurseur à la génération de bradykinine lors de l’activation du système de contact. La libération protéolytique de bradykinine par les kallicréines active les récepteurs de la bradykinine et régule ainsi le tonus vasculaire, la perméabilité endothéliale, la transmission de la douleur et la production de médiateurs inflammatoires, reliant **KNG1** au dialogue coagulation–inflammation au sein du système kallicréine–kinine. L’activité de **KNG1** s’articule avec la coagulation intrinsèque et des processus liés au complément via des interactions avec le facteur XII, la prékallicréine et des partenaires de liaison de surface au niveau de l’endothélium. Une dérégulation de la production de bradykinine ou de sa signalisation est impliquée dans des états inflammatoires sujets à l’œdème et dans la dysfonction vasculaire, faisant de **KNG1** un nœud pertinent pour des études mécanistiques des cascades de protéases plasmatiques.
bradykinin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KNG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KNG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KNG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KNG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.