Plasmide CRISPR d'Activation (h) BR-cadherin: sc-401987-ACT

CDH12 code la BR-cadhérine, une cadhérine classique particulièrement abondante dans le système nerveux, qui assure une adhésion cellule–cellule homophile dépendante du Ca2+ et contribue à l’architecture des tissus. Via sa liaison aux caténines et son ancrage au cytosquelette d’actine, la BR-cadhérine participe à l’organisation des jonctions d’adhérence, à la polarité cellulaire et à des programmes de migration coordonnée qui façonnent le développement neural. Une expression altérée des cadhérines peut perturber la dynamique d’adhésion épithéliale/neuronale et moduler les interactions de signalisation avec des voies telles que Wnt/β-caténine et le remodelage du cytosquelette régulé par les GTPases Rho. Une dérégulation de CDH12 a été rapportée dans des études portant sur des phénotypes neurodéveloppementaux et la biologie tumorale, ce qui motive l’exploration de la manière dont des changements de l’état d’adhérence influencent l’invasion, la connectivité et la différenciation.

BR-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BR-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BR-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BR-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BR-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.