BPTF Lentiviral Activation Particles (h): sc-404092-LAC

BPTF (bromodomain PHD finger transcription factor) ist eine zentrale Komponente des NURF-Chromatin-Remodeling-Komplexes, die über ihren PHD-Finger und ihre Bromodomäne Histonmarkierungen erkennt, um die Nukleosomenpositionierung und den Transkriptionsoutput zu regulieren. Durch die Modulation der Chromatinzugänglichkeit beeinflusst BPTF RNA-Polymerase-II-abhängige Genexpressionsprogramme, die an Zellzykluskontrolle, Linienfestlegung und DNA-Schadensantworten beteiligt sind. Es wirkt an der epigenetischen Regulation über Entwicklungs- und Proliferationswege hinweg mit und verknüpft Landschaften von Histonmodifikationen mit der Aktivität von Transkriptionsfaktoren. Eine dysregulierte BPTF-Expression oder -Funktion wurde mit veränderten Chromatinzuständen in der Krebsbiologie und in neuroentwicklungsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, was BPTF zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Transkriptionsregulation macht.

BPTF Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente BPTF-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BPTF Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der BPTF-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BPTF-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen BPTF-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.