Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BPGM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405810
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- BPGM El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico BPGM, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BPGM Anticuerpo (C-4): sc-373819
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
BPGM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405810 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La mutasa de bisfosfoglicerato (BPGM) es una enzima enriquecida en células eritroides que regula los niveles de 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG), un efector alostérico clave de la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno. Al interconvertir 1,3-bisfosfoglicerato y 2,3-BPG, la BPGM vincula el flujo glucolítico con la fisiología de la entrega de oxígeno y la homeostasis metabólica de los glóbulos rojos. Una actividad alterada de la BPGM puede desplazar las concentraciones de 2,3-BPG y modular la oxigenación tisular, lo que la hace relevante para estudios del metabolismo eritrocitario, la adaptación a la hipoxia y los fenotipos hematológicos. Dado que el 2,3-BPG afecta la función de la hemoglobina sin cambiar la cantidad de hemoglobina, la BPGM se utiliza con frecuencia para analizar puntos de control metabólicos que influyen en la dinámica de unión al oxígeno.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO BPGM (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BPGM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BPGM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BPGM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BPGM.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BPGM para la investigación de la señalización de BPGM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de BPGM críticos para la función de BPGM
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BPGM para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido BPGM CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BPGM CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BPGM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BPGM (h) y el plásmido HDR BPGM (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BPGM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BPGM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.