Plasmide Double Nickase (m) BMPR-IA: sc-419350-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) BMPR-IA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BMPR-IA Double Nickase (m) et le plasmide BMPR-IA Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Bmpr1a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) BMPR-IA | sc-419350-NIC | 20 µg | $410.00 |
Bmpr1a code pour BMPR-IA (ALK3), un récepteur de type I à activité sérine/thréonine kinase des protéines morphogénétiques osseuses (BMP), qui transmet les signaux via SMAD1/5/9 afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la mise en place des axes embryonnaires, la différenciation ostéogénique et chondrogénique, ainsi que l’homéostasie tissulaire. Après formation d’un complexe dépendante du ligand avec les récepteurs BMP de type II, BMPR-IA active la signalisation canonique des voies BMP/TGF-β, ainsi que, selon le contexte, un dialogue avec les cascades MAPK influençant la prolifération, l’apoptose et l’engagement de lignée. Chez la souris, une activité altérée de Bmpr1a perturbe la morphogenèse du développement et le remodelage squelettique, et sert à modéliser des dysfonctionnements de la voie pertinents pour les malformations congénitales, le remodelage associé à la fibrose et la biologie osseuse. Ces caractéristiques font de BMPR-IA un nœud central pour disséquer les décisions de destin cellulaire dépendantes des BMP au cours du développement et dans des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie.
BMPR-IA Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Bmpr1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Bmpr1a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Bmpr1a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Bmpr1a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.