Plasmide Double Nickase (h) BMPR-IA: sc-400581-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BMPR-IA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BMPR-IA Double Nickase (h) et le plasmide BMPR-IA Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BMPR1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BMPR-IA Antibody (7K7): sc-134285
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BMPR-IA | sc-400581-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BMPR-IA | sc-400581-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BMPR1A code pour le récepteur de type I des protéines morphogénétiques osseuses BMPR-IA, une kinase sérine/thréonine qui s’associe aux récepteurs BMP de type II pour transmettre les signaux des ligands BMP. Une fois activé, BMPR-IA phosphoryle SMAD1/5/9 afin de déclencher des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD4, qui régulent l’organisation embryonnaire, la différenciation ostéogénique et chondrogénique, ainsi que l’homéostasie épithéliale, avec en outre des interactions avec les voies MAPK et PI3K. Dans les cellules humaines, une signalisation BMPR1A altérée perturbe l’équilibre du réseau BMP/TGF-β et a été associée à une dérégulation du comportement des cellules souches et au remodelage tissulaire. Les variations génétiques ou la perte de fonction de BMPR1A sont associées à des anomalies du développement et à une prédisposition à une polypose gastro-intestinale hamartomateuse, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques du contrôle de la croissance et de la différenciation.
BMPR-IA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BMPR1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BMPR1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BMPR1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BMPR1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.