Plasmide CRISPR/Cas9 KO BMPR-IA (h2): sc-400581-KO-2

Présentation

BMPR1A code le récepteur de la protéine morphogénétique osseuse de type IA (BMPR‑IA), un récepteur kinase à sérine/thréonine qui se lie aux ligands BMP et initie la signalisation canonique SMAD1/5/9 ainsi que des voies MAPK non canoniques. Par l’intermédiaire de ces cascades, BMPR‑IA régule la spécification du destin cellulaire, la prolifération, la différenciation et la morphogenèse tissulaire, avec des rôles majeurs dans les programmes ostéogéniques et l’homéostasie épithéliale. Une signalisation BMPR1A altérée est impliquée dans des anomalies du développement et des processus liés au cancer via une dérégulation de l’activité des voies BMP/TGF‑β, notamment par des effets sur la dynamique des cellules souches et le contrôle de la croissance. BMPR1A est donc largement étudié dans des contextes tels que l’engagement de lignée, la biologie des organoïdes et les interactions (crosstalk) entre voies de transduction du signal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BMPR-IA (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BMPR1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BMPR1A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BMPR1A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BMPR-IA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BMPR1A pour l'étude de la signalisation de BMPR-IA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BMPR1A essentiels à la fonction de BMPR-IA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BMPR1A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BMPR-IA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BMPR-IA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BMPR1A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BMPR-IA plasmide HDR (h) et le BMPR-IA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BMPR1A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BMPR1A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.