Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMPR-IA: sc-400581-ACT

BMPR1A code le récepteur de type IA des protéines morphogénétiques osseuses (BMPR-IA), un récepteur kinase sérine/thréonine qui transmet les signaux des ligands BMP afin de réguler les décisions de destin cellulaire, la mise en place des tissus (patterning) et le contrôle homéostatique de la prolifération et de la différenciation. Après liaison du ligand en présence des récepteurs BMP de type II, BMPR-IA active la voie canonique SMAD1/5/9 et interagit avec des voies MAPK non canoniques pour façonner des programmes transcriptionnels dans divers types cellulaires. L’activité de BMPR1A est centrale dans les processus de développement et de régénération, en particulier dans les lignées épithéliales et mésenchymateuses, et contribue à une régulation dépendante du contexte du comportement des cellules souches/progénitrices. Une signalisation BMP/BMPR1A dérégulée a été impliquée dans des anomalies congénitales et des phénotypes liés au cancer via une altération de la différenciation et du contrôle de la croissance.

BMPR-IA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMPR1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMPR-IA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMPR1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMPR1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMPR-IA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMPR1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMPR-IA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMPR-IA dans les cellules tumorales présentant une expression de BMPR1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.