Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMP-8A: sc-406589-ACT

Le gène humain **BMP8A** code la protéine morphogénétique osseuse 8A (BMP‑8A), un ligand sécrété de la superfamille du TGF‑β qui transmet son signal via les récepteurs BMP de type I/II à activité sérine/thréonine kinase, activant des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD1/5/8. BMP‑8A contribue à la mise en place des patrons de développement, à la différenciation tissulaire et à la régulation du remodelage de la matrice extracellulaire, avec un dialogue en aval avec les voies MAPK pouvant influencer la prolifération et l’engagement de lignée. Dans des modèles cellulaires, la signalisation associée à BMP8A est fréquemment étudiée dans des contextes d’ostéogenèse et de biologie de la reproduction, où une activité altérée de la voie BMP est liée à une morphogenèse dérégulée et à des phénotypes de type fibrotique. La perturbation des composants de la signalisation BMP, notamment la disponibilité du ligand et la dynamique récepteur‑SMAD, est pertinente pour les études mécanistiques des troubles du développement et des modifications de la décision de destinée cellulaire induites par la voie.

BMP-8A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMP8A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-8A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMP8A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMP8A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-8A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMP8A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-8A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-8A dans les cellules tumorales présentant une expression de BMP8A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.