BMP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400514

Übersicht

BMP2 kodiert das Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP-2), einen sezernierten Liganden der TGF-β-Superfamilie, der hauptsächlich über Serin/Threonin-Kinaserezeptoren vom Typ I/II signalisiert, um SMAD1/5/8 zu aktivieren, und zugleich mit MAPK-Signalwegen interagiert. BMP-2 reguliert die osteogene und chondrogene Differenzierung, den Umbau der extrazellulären Matrix und Musterbildungsprozesse in der Entwicklung und beeinflusst Zellschicksalsentscheidungen in verschiedenen mesenchymalen Linien. Eine Fehlregulation der BMP2-Signalgebung wurde mit aberranter Ossifikation, Skelettfehlbildungen und veränderten Signalen aus dem Tumormikromilieu in Verbindung gebracht, die Proliferation, Migration und epithelial‑mesenchymale Programme beeinflussen. Daher wird BMP2 in der Knochenbiologie, in regenerativen Modellsystemen und in Analysen von Signalweg‑Crosstalk innerhalb der TGF‑β/BMP-Signalgebung breit untersucht.

Das BMP-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BMP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BMP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BMP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BMP-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BMP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BMP-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BMP2-Exone abzielen, die für die BMP-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BMP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BMP-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BMP-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BMP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BMP-2 HDR-Plasmid (h) und BMP-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BMP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BMP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.