Plasmide CRISPR/Cas9 KO BMAL2 (m): sc-435462

Présentation

Arntl2 code pour BMAL2, un facteur de transcription bHLH-PAS (basic helix–loop–helix PAS) qui forme des hétérodimères avec CLOCK/NPAS2 afin de réguler l’expression génique dépendante des boîtes E (E-box) et de coordonner, dans les tissus de souris, les programmes transcriptionnels circadiens et métaboliques. BMAL2 influence le circuit central de l’horloge, la régulation rythmique de la chromatine et des voies en aval, notamment l’homéostasie rédox, le métabolisme des lipides et du glucose, ainsi que la synchronisation du cycle cellulaire, via le contrôle transcriptionnel de gènes contrôlés par l’horloge. La dérégulation des réseaux associés à ARNTL2/BMAL2 a été reliée dans la littérature à une altération de la signalisation inflammatoire, des réponses au stress et à des modifications de la migration et de la différenciation cellulaires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la perturbation circadienne. Des modèles in vivo et cellulaires impliquent BMAL2 dans les sorties d’horloge spécifiques aux tissus et dans l’adaptation aux signaux environnementaux, ce qui soutient son utilisation en recherche en neurobiologie, métabolisme et états transcriptionnels associés aux tumeurs, sans préjuger d’issues cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BMAL2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Arntl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Arntl2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Arntl2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BMAL2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Arntl2 pour l'étude de la signalisation de BMAL2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Arntl2 essentiels à la fonction de BMAL2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Arntl2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BMAL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BMAL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Arntl2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BMAL2 plasmide HDR (m) et le BMAL2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Arntl2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Arntl2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.