Plasmide Double Nickase (m) BMAL1: sc-419206-NIC

Arntl code le facteur de transcription circadien central BMAL1, qui forme un hétérodimère avec CLOCK pour se lier aux éléments E-box et entraîner l’expression rythmique des gènes contrôlés par l’horloge. Ce réseau de rétroaction transcription–traduction coordonne, dans les différents tissus, des oscillations cellulaires liées au métabolisme, à l’homéostasie redox, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la signalisation immunitaire. L’activité de BMAL1 s’interface avec des voies comprenant la répression par PER/CRY, les boucles des récepteurs nucléaires REV-ERB/ROR et des programmes de détection des nutriments qui ajustent la fonction mitochondriale ainsi que l’utilisation des lipides et du glucose. Une dérégulation de la signalisation ARNTL/BMAL1 a été associée à des phénotypes veille–sommeil et comportementaux dans des systèmes modèles, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de processus métaboliques, inflammatoires, neurodégénératifs et liés au cancer, où le contrôle circadien module des programmes d’expression génique pertinents pour la maladie.

BMAL1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Arntl dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Arntl. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Arntl. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Arntl.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.