Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BMAL1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419206-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BMAL1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- BMAL1ダブルニカースプラスミド（m）およびBMAL1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Arntlを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: BMAL1 抗体 (B-1): sc-365645
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BMAL1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-419206-NIC | 20 µg | $410.00 |
Arntl は中核的な概日時計転写因子 BMAL1 をコードしており、BMAL1 は CLOCK とヘテロ二量体を形成して E-box 配列に結合し、時計制御遺伝子のリズミックな発現を駆動します。この転写―翻訳フィードバックネットワークは、組織横断的に代謝、レドックス恒常性、DNA 損傷応答、免疫シグナル伝達における細胞内振動を協調させます。BMAL1 活性は、PER/CRY による抑制、REV-ERB/ROR を介した核内受容体ループ、ならびにミトコンドリア機能や脂質・グルコース利用を調整する栄養感知プログラムなどの経路と連動しています。ARNTL/BMAL1 シグナルの破綻は、モデル系における睡眠―覚醒や行動表現型と関連づけられており、概日制御が疾患関連の遺伝子発現プログラムを調節する代謝、炎症、神経変性、がん関連プロセスの文脈で頻繁に研究されています。
BMAL1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Arntl 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Arntl内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Arntlの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Arntlが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。