Plásmido Doble Nickase (h) BLM: sc-400896-NIC

BLM codifica una helicasa de ADN de la familia RecQ que preserva la estabilidad del genoma al desenrollar estructuras secundarias anómalas del ADN y coordinar la resección de extremos de ADN durante la recombinación homóloga. BLM actúa junto con el complejo BTRR (BLM–TOP3A–RMI1/2) para disolver dobles uniones de Holliday, limitando los eventos de entrecruzamiento y favoreciendo una segregación cromosómica fiel. Está integrada en el control del punto de control de la fase S, el reinicio de horquillas de replicación detenidas y las vías de mantenimiento de telómeros, que restringen la rotura cromosómica y el intercambio entre cromátidas hermanas. La pérdida o disfunción de BLM altera las respuestas al estrés replicativo y se asocia con fenotipos de inestabilidad genómica propios del síndrome de Bloom y con una mayor predisposición al cáncer en modelos experimentales.

BLM El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BLM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BLM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BLM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BLM alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.