BLM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419336

Descripción general

Blm codifica la helicasa de ADN BLM de la familia RecQ en ratón, un factor central en el mantenimiento del genoma que limita la recombinación homóloga aberrante y ayuda a resolver horquillas de replicación detenidas. BLM actúa junto con la topoisomerasa IIIα, RMI1/2 y otras proteínas de reparación para procesar intermediarios de recombinación, promover la reparación precisa de roturas de doble cadena del ADN y favorecer la progresión de la fase S. A través de sus funciones en las respuestas al estrés replicativo, la estabilidad de los telómeros y la señalización de puntos de control, BLM influye en la acumulación de mutaciones y en los reordenamientos cromosómicos. La actividad desregulada de BLM se asocia con un aumento de los fenotipos de inestabilidad genómica, ampliamente relevantes para estudios de biología del cáncer, señalización del daño en el ADN y mantenimiento del genoma asociado al envejecimiento.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BLM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Blm en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Blm junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Blm tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BLM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Blm para la investigación de la señalización de BLM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Blm críticos para la función de BLM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Blm para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BLM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido BLM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Blm. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BLM (m) y el plásmido HDR BLM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Blm para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Blm definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.