Plasmide Double Nickase (h) Blk: sc-402737-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Blk correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Blk Double Nickase (h) et le plasmide Blk Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BLK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Blk Antibody (9D10D1): sc-65980
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Blk | sc-402737-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Blk | sc-402737-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BLK code la tyrosine kinase lymphoïde B (Blk), une tyrosine kinase cytoplasmique de la famille Src (non réceptrice) enrichie dans les cellules B, qui couple l’engagement du récepteur des cellules B (BCR) à des cascades de phosphorylation en aval. Blk participe à la signalisation proximale des immunorécepteurs et module des voies contrôlant les flux de calcium, l’activation des MAPK et des programmes de survie et de différenciation dépendants de PI3K. Des altérations de l’expression ou de l’activité de BLK ont été associées à une dérégulation du développement des cellules B et à une signalisation immunitaire aberrante, et des associations génétiques impliquent BLK dans la susceptibilité aux maladies auto-immunes. Ces propriétés font de BLK une cible utile pour explorer les mécanismes d’activation des cellules B, de tolérance et de remodelage des réseaux de signalisation dans des modèles immunitaires humains.
Blk Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BLK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BLK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BLK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BLK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.