Blk Plasmide Double Nickase (h): sc-402737-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Blk Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Blk Double Nickase Plasmid (h) e il Blk Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BLK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Blk Antibody (9D10D1): sc-65980
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Blk Plasmide Double Nickase (h) | sc-402737-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Blk Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402737-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BLK codifica la tirosin-chinasi dei linfociti B (Blk), una tirosin-chinasi non recettoriale della famiglia Src arricchita nelle cellule B che collega l’attivazione del recettore delle cellule B (BCR) a cascati di fosforilazione a valle. Blk partecipa alla segnalazione prossimale degli immunorecettori e modula vie che controllano il flusso di calcio, l’attivazione delle MAPK e programmi di sopravvivenza e differenziamento dipendenti da PI3K. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di BLK sono state collegate a uno sviluppo disregolato delle cellule B e a una segnalazione immunitaria aberrante, e associazioni genetiche implicano BLK nella suscettibilità alle malattie autoimmuni. Queste proprietà rendono BLK un bersaglio utile per studiare i meccanismi di attivazione e tolleranza delle cellule B e il rimodellamento delle reti di segnalazione in modelli immunitari umani.
Blk Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BLK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BLK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BLK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BLK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.