BLCAM Plasmide Double Nickase (h): sc-401451-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD22 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD22 Double Nickase Plasmid (h) e il CD22 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD22. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD22 Antibody (D-5): sc-271579
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BLCAM Plasmide Double Nickase (h) | sc-401451-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD22 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401451-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD22 umano, noto anche come BLCAM, è una lectina di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico, espressa in modo ristretto nelle cellule B, che funge da co-recettore inibitorio del recettore dell’antigene delle cellule B (BCR). In seguito all’ingaggio del BCR, CD22 viene fosforilato e recluta la fosfatasi SHP-1, attenuando la segnalazione delle chinasi a valle e modulando il flusso di calcio, l’attivazione di MAPK e le vie collegate a PI3K che determinano l’attivazione e la tolleranza delle cellule B. Attraverso il controllo delle soglie di segnalazione e la promozione dell’omeostasi immunitaria, CD22 contribuisce alla regolazione della responsività all’antigene, dei segnali di sopravvivenza e al mantenimento dell’autotolleranza periferica delle cellule B. Una segnalazione o un’espressione deregolata di CD22 è stata associata a stati di attivazione aberranti delle cellule B rilevanti per l’autoimmunità e per la biologia delle neoplasie derivate da cellule B, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sul controllo della via del BCR.
CD22 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD22 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD22. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD22. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD22 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.